மெழுகுவர்த்திக்கான தூய சபோஷ்னிகோவியா டிவரிகேட்டா எண்ணெய் மற்றும் சோப்பு தயாரிக்கும் மொத்த டிஃப்பியூசர் அத்தியாவசிய எண்ணெய் நாணல் பர்னர் டிஃப்பியூசர்களுக்கு புதியது

குறுகிய விளக்கம்:

 

2.1 SDE தயாரித்தல்

SD இன் வேர்த்தண்டுக்கிழங்குகள் Hanherb Co. (குரி, கொரியா) இலிருந்து உலர்ந்த மூலிகையாக வாங்கப்பட்டன. கொரியா இன்ஸ்டிடியூட் ஆப் ஓரியண்டல் மெடிசின் (KIOM) டாக்டர். கோ-யா சோய் மூலம் தாவரப் பொருட்கள் வகைபிரித்தல் மூலம் உறுதிப்படுத்தப்பட்டது. ஒரு வவுச்சர் மாதிரி (எண் 2014 SDE-6) கொரிய ஹெர்பேரியம் ஆஃப் ஸ்டாண்டர்ட் ஹெர்பல் ரிசோர்ஸில் டெபாசிட் செய்யப்பட்டது. SD இன் உலர்ந்த வேர்த்தண்டுக்கிழங்குகள் (320 கிராம்) 70% எத்தனால் (2 மணிநேர ரிஃப்ளக்ஸ் உடன்) இரண்டு முறை பிரித்தெடுக்கப்பட்டன, பின்னர் சாறு குறைக்கப்பட்ட அழுத்தத்தின் கீழ் குவிக்கப்பட்டது. காபி தண்ணீர் வடிகட்டப்பட்டு, லியோபிலைஸ் செய்யப்பட்டு, 4 டிகிரி செல்சியஸ் வெப்பநிலையில் சேமிக்கப்படுகிறது. கச்சா தொடக்கப் பொருட்களிலிருந்து உலர்ந்த சாற்றின் விளைச்சல் 48.13% (w/w).

 

2.2 அளவு உயர் செயல்திறன் திரவ குரோமடோகிராபி (HPLC) பகுப்பாய்வு

HPLC அமைப்பு (Waters Co., Milford, MA, USA) மற்றும் ஃபோட்டோடியோட் அரே டிடெக்டர் மூலம் குரோமடோகிராஃபிக் பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டது. SDE இன் HPLC பகுப்பாய்விற்கு, முதன்மை-Oபாரம்பரிய மருத்துவத் தொழில்துறைக்கான கொரியா ஊக்குவிப்பு நிறுவனத்திடமிருந்து (கியோங்சன், கொரியா) குளுக்கோசைல்சிமிஃபுகின் தரநிலை வாங்கப்பட்டது.நொடி-ஓ-குளுக்கோசில்ஹமடோல் மற்றும் 4′-O-β-டி-குளுக்கோசில்-5-O-மெதில்விசம்மினோல் எங்கள் ஆய்வகத்தில் தனிமைப்படுத்தப்பட்டு நிறமாலை பகுப்பாய்வுகளால் அடையாளம் காணப்பட்டது, முதன்மையாக NMR மற்றும் MS ஆல்.

SDE மாதிரிகள் (0.1 mg) 70% எத்தனாலில் (10 mL) கரைக்கப்பட்டது. XSelect HSS T3 C18 நெடுவரிசை (4.6 × 250 மிமீ, 5) மூலம் குரோமடோகிராஃபிக் பிரிப்பு செய்யப்பட்டது.μமீ, வாட்டர்ஸ் கோ., மில்ஃபோர்ட், எம்ஏ, அமெரிக்கா). மொபைல் கட்டத்தில் அசிட்டோனிட்ரைல் (A) மற்றும் 0.1% அசிட்டிக் அமிலம் நீரில் (B) 1.0 mL/min ஓட்ட விகிதத்தில் இருந்தது. ஒரு பலபடி சாய்வு நிரல் பின்வருமாறு பயன்படுத்தப்பட்டது: 5% A (0 நிமிடம்), 5-20% A (0-10 நிமிடம்), 20% A (10-23 நிமிடம்), மற்றும் 20-65% A (23-40 நிமிடம்) ) கண்டறிதல் அலைநீளம் 210-400 nm இல் ஸ்கேன் செய்யப்பட்டு 254 nm இல் பதிவு செய்யப்பட்டது. ஊசி அளவு 10.0μஎல். மூன்று குரோமோன்களை தீர்மானிப்பதற்கான நிலையான தீர்வுகள் 7.781 mg/mL (prim-) இறுதி செறிவில் தயாரிக்கப்பட்டன.O-குளுக்கோசைல்சிமிஃபுகின்), 31.125 mg/mL (4′-O-β-டி-குளுக்கோசில்-5-O-மெதில்விசம்மினோல்), மற்றும் 31.125 mg/mL (நொடி-ஓ-குளுக்கோசில்ஹமௌடோல்) மெத்தனாலில் 4°C இல் வைக்கப்படுகிறது.

2.3 அழற்சி எதிர்ப்பு நடவடிக்கையின் மதிப்பீடுவிட்ரோவில்

2.3.1. செல் கலாச்சாரம் மற்றும் மாதிரி சிகிச்சை

RAW 264.7 செல்கள் அமெரிக்க வகை கலாச்சார சேகரிப்பில் (ATCC, Manassas, VA, USA) பெறப்பட்டு 1% நுண்ணுயிர் எதிர்ப்பிகள் மற்றும் 5.5% FBS கொண்ட DMEM ஊடகத்தில் வளர்க்கப்பட்டன. செல்கள் 5% CO2 ஈரப்பதமான வளிமண்டலத்தில் 37 ° C இல் அடைக்கப்பட்டுள்ளன. செல்களைத் தூண்டுவதற்கு, நடுத்தரமானது புதிய DMEM ஊடகம் மற்றும் லிப்போபோலிசாக்கரைடு (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, USA) 1 இல் மாற்றப்பட்டது.μSDE (200 அல்லது 400) முன்னிலையில் அல்லது இல்லாத நிலையில் g/mL சேர்க்கப்பட்டதுμg/mL) கூடுதல் 24 மணிநேரத்திற்கு.

2.3.2. நைட்ரிக் ஆக்சைடு (NO), ப்ரோஸ்டாக்லாண்டின் E2 (PGE2), கட்டி நெக்ரோசிஸ் காரணி-α(TNF-α), மற்றும் Interleukin-6 (IL-6) உற்பத்தி

செல்கள் SDE உடன் சிகிச்சையளிக்கப்பட்டு 24 மணிநேரத்திற்கு LPS உடன் தூண்டப்பட்டன. முந்தைய ஆய்வின்படி க்ரீஸ் ரீஜென்டைப் பயன்படுத்தி நைட்ரைட்டை அளவிடுவதன் மூலம் எந்த உற்பத்தியும் பகுப்பாய்வு செய்யப்படவில்லை.12]. அழற்சி சைட்டோகைன்களின் சுரப்பு PGE2, TNF-α, மற்றும் IL-6 உற்பத்தியாளர் அறிவுறுத்தல்களின்படி ELISA கிட் (R&D அமைப்புகள்) பயன்படுத்தி தீர்மானிக்கப்பட்டது. NO மற்றும் சைட்டோகைன் உற்பத்தியில் SDE இன் விளைவுகள் வாலாக் என்விஷனைப் பயன்படுத்தி 540 nm அல்லது 450 nm இல் தீர்மானிக்கப்பட்டது.™மைக்ரோ பிளேட் ரீடர் (பெர்கின்எல்மர்).

2.4 ஆண்டியோஸ்டியோஆர்த்ரிடிஸ் செயல்பாட்டின் மதிப்பீடுவிவோவில்

2.4.1. விலங்குகள்

ஆண் ஸ்ப்ராக்-டாவ்லி எலிகள் (7 வார வயதுடையவை) சம்டாகோ இங்க்°C மற்றும்% ஈரப்பதம். எலிகளுக்கு ஆய்வக உணவு மற்றும் தண்ணீர் வழங்கப்பட்டதுஇலவசம். அனைத்து சோதனை நடைமுறைகளும் தேசிய சுகாதார நிறுவனங்களின் (NIH) வழிகாட்டுதல்களுக்கு இணங்க மேற்கொள்ளப்பட்டன மற்றும் டேஜியோன் பல்கலைக்கழகத்தின் (டேஜியோன், கொரியா குடியரசு) விலங்கு பராமரிப்பு மற்றும் பயன்பாட்டுக் குழுவால் அங்கீகரிக்கப்பட்டது.

2.4.2. எலிகளில் MIA உடன் OA இன் தூண்டல்

ஆய்வின் தொடக்கத்திற்கு முன் விலங்குகள் சீரற்றதாக மாற்றப்பட்டு சிகிச்சை குழுக்களுக்கு ஒதுக்கப்பட்டன (ஒரு குழுவிற்கு). MIA தீர்வு (3 mg/50μ0.9% உமிழ்நீரின் எல்) கெட்டமைன் மற்றும் சைலாசின் கலவையுடன் தூண்டப்பட்ட மயக்க மருந்துகளின் கீழ் வலது முழங்காலின் உள்-மூட்டு இடைவெளியில் நேரடியாக செலுத்தப்பட்டது. எலிகள் தோராயமாக நான்கு குழுக்களாகப் பிரிக்கப்பட்டன: (1) MIA ஊசி இல்லாத உப்புக் குழு, (2) MIA ஊசியுடன் MIA குழு, (3) SDE- சிகிச்சை பெற்ற குழு (200 mg/kg) MIA ஊசியுடன், மற்றும் (4 MIA ஊசி மூலம் இண்டோமெதாசின்- (IM-) சிகிச்சை குழு (2 mg/kg). 4 வாரங்களுக்கு MIA ஊசி போடுவதற்கு 1 வாரத்திற்கு முன்பு எலிகள் SDE மற்றும் IM உடன் வாய்வழியாக செலுத்தப்பட்டன. இந்த ஆய்வில் பயன்படுத்தப்பட்ட SDE மற்றும் IM இன் அளவு முந்தைய ஆய்வுகளில் பயன்படுத்தப்பட்டதை அடிப்படையாகக் கொண்டது.10,13,14].

2.4.3. ஹிண்ட்பா எடை தாங்கும் விநியோகத்தின் அளவீடுகள்

OA தூண்டலுக்குப் பிறகு, பின்னங்கால்களின் எடை தாங்கும் திறனில் அசல் சமநிலை சீர்குலைந்தது. எடை தாங்கும் சகிப்புத்தன்மையில் ஏற்படும் மாற்றங்களை மதிப்பிடுவதற்கு இயலாமை சோதனையாளர் (லிண்டன் இன்ஸ்ட்ரூமென்டேஷன், நோர்ஃபோக், யுகே) பயன்படுத்தப்பட்டது. எலிகள் கவனமாக அளவீட்டு அறைக்குள் வைக்கப்பட்டன. பின்னங்கால் செலுத்தப்படும் எடை தாங்கும் சக்தியானது 3 வினாடிகளுக்கு சராசரியாக இருந்தது. எடை விநியோக விகிதம் பின்வரும் சமன்பாட்டின் மூலம் கணக்கிடப்பட்டது: [வலது பின்னங்காலில் எடை/(வலது பின்னங்கால் எடை + இடது பின்னங்கால் எடை)] × 100 [15].

2.4.4. சீரம் சைட்டோகைன் அளவுகளின் அளவீடுகள்

இரத்த மாதிரிகள் 10 நிமிடங்களுக்கு 1,500 கிராம் 4 டிகிரி செல்சியஸில் மையவிலக்கு செய்யப்பட்டன; பின்னர் சீரம் சேகரிக்கப்பட்டு பயன்படுத்தப்படும் வரை −70°C இல் சேமிக்கப்பட்டது. IL-1 இன் நிலைகள்β, IL-6, TNF-α, மற்றும் சீரம் உள்ள PGE2 உற்பத்தியாளர் அறிவுறுத்தல்களின்படி R&D சிஸ்டம்ஸ் (Minneapolis, MN, USA) இலிருந்து ELISA கருவிகளைப் பயன்படுத்தி அளவிடப்பட்டது.

2.4.5 நிகழ்நேர அளவு RT-PCR பகுப்பாய்வு

டிஆர்ஐ ரியாஜென்ட்® (சிக்மா-ஆல்ட்ரிச், செயின்ட் லூயிஸ், எம்ஓ, யுஎஸ்ஏ) மூலம் முழங்கால் மூட்டு திசுக்களில் இருந்து மொத்த ஆர்என்ஏ பிரித்தெடுக்கப்பட்டது, சிடிஎன்ஏவில் தலைகீழாக டிரான்ஸ்கிரிப்ட் செய்யப்பட்டு, எஸ்ஒய்பிஆர் கிரீன் (அப்ளைடு பயோசிஸ்டம்ஸ்) கொண்ட டிஎம் ஒன் ஸ்டெப் ஆர்டி பிசிஆர் கிட்டைப் பயன்படுத்தி பிசிஆர் பெருக்கப்பட்டது. , Grand Island, NY, USA). அப்ளைடு பயோசிஸ்டம்ஸ் 7500 ரியல்-டைம் பிசிஆர் சிஸ்டம் (அப்ளைடு பயோசிஸ்டம்ஸ், கிராண்ட் ஐலேண்ட், என்ஒய், யுஎஸ்ஏ) பயன்படுத்தி நிகழ்நேர அளவு பிசிஆர் செய்யப்பட்டது. ப்ரைமர் வரிசைகள் மற்றும் ஆய்வு-வரிசை ஆகியவை அட்டவணையில் காட்டப்பட்டுள்ளன1. உற்பத்தியாளர் அறிவுறுத்தல்களின்படி (அப்ளைடு பயோசிஸ்டம்ஸ், ஃபாஸ்டர், சிஏ, யுஎஸ்ஏ) டிஎன்ஏ பாலிமரேஸைக் கொண்ட டாக்மான் ® யுனிவர்சல் பிசிஆர் மாஸ்டர் கலவையுடன் மாதிரி சிடிஎன்ஏக்களின் அலிகோட்கள் மற்றும் சம அளவு ஜிஏபிடிஹெச் சிடிஎன்ஏ பெருக்கப்பட்டது. PCR நிலைமைகள் 50 ° C இல் 2 நிமிடம், 94 ° C இல் 10 நிமிடம், 95 ° C இல் 15 வினாடிகள் மற்றும் 40 சுழற்சிகளுக்கு 60 ° C இல் 1 நிமிடம். உற்பத்தியாளர் அறிவுறுத்தல்களின்படி, இலக்கு மரபணுவின் செறிவு ஒப்பீட்டு Ct (அம்ப்ளிபிகேஷன் ப்ளாட் மற்றும் த்ரெஷோல்ட் இடையே குறுக்கு புள்ளியில் உள்ள வாசல் சுழற்சி எண்) முறையைப் பயன்படுத்தி தீர்மானிக்கப்பட்டது.

FOB விலை:அமெரிக்க $0.5 - 9,999 / துண்டு

குறைந்தபட்ச ஆர்டர் அளவு:100 துண்டுகள்/துண்டுகள்

வழங்கல் திறன்:ஒரு மாதத்திற்கு 10000 துண்டுகள்/துண்டுகள்