மெழுகுவர்த்தி மற்றும் சோப்பு தயாரிப்பதற்கான தூய சபோஷ்னிகோவியா டைவரிகேட்டா எண்ணெய், நாணல் பர்னர் டிஃப்பியூசர்களுக்கு புதிய மொத்த டிஃப்பியூசர் அத்தியாவசிய எண்ணெய்.

குறுகிய விளக்கம்:

 

2.1. SDE தயாரிப்பு

SD இன் வேர்த்தண்டுக்கிழங்குகள் ஹான்ஹெர்ப் கோ. (குரி, கொரியா) இலிருந்து உலர்ந்த மூலிகையாக வாங்கப்பட்டன. தாவரப் பொருட்கள் கொரியா ஓரியண்டல் மருத்துவ நிறுவனத்தின் (KIOM) டாக்டர் கோ-யா சோய் என்பவரால் வகைபிரித்தல் ரீதியாக உறுதிப்படுத்தப்பட்டன. ஒரு வவுச்சர் மாதிரி (எண் 2014 SDE-6) கொரிய ஹெர்பேரியம் ஆஃப் ஸ்டாண்டர்ட் ஹெர்பல் ரிசோர்சஸில் வைக்கப்பட்டது. SD இன் உலர்ந்த வேர்த்தண்டுக்கிழங்குகள் (320 கிராம்) 70% எத்தனால் (2 மணிநேர ரிஃப்ளக்ஸ் உடன்) இரண்டு முறை பிரித்தெடுக்கப்பட்டு, பின்னர் சாறு குறைக்கப்பட்ட அழுத்தத்தின் கீழ் செறிவூட்டப்பட்டது. காபி தண்ணீர் வடிகட்டப்பட்டு, லியோபிலைஸ் செய்யப்பட்டு, 4°C இல் சேமிக்கப்பட்டது. கச்சா தொடக்கப் பொருட்களிலிருந்து உலர்ந்த சாற்றின் மகசூல் 48.13% (w/w) ஆகும்.

 

2.2. அளவுசார் உயர் செயல்திறன் திரவ நிறமூர்த்தவியல் (HPLC) பகுப்பாய்வு

குரோமடோகிராஃபிக் பகுப்பாய்வு ஒரு HPLC அமைப்பு (வாட்டர்ஸ் கோ., மில்ஃபோர்ட், MA, அமெரிக்கா) மற்றும் ஒரு ஃபோட்டோடியோட் வரிசை கண்டறிப்பான் மூலம் செய்யப்பட்டது. SDE இன் HPLC பகுப்பாய்விற்கு, முதன்மை-O- குளுக்கோசில்சிமிஃபுஜின் தரநிலை கொரியா பாரம்பரிய மருத்துவத் தொழிலுக்கான ஊக்குவிப்பு நிறுவனத்திலிருந்து (கியோங்சன், கொரியா) வாங்கப்பட்டது, மற்றும்நொடி-O-குளுக்கோசில்ஹாமாடோல் மற்றும் 4′-O-β-டி-குளுக்கோசில்-5-O-மெத்தில்விசம்மினோல் எங்கள் ஆய்வகத்திற்குள் தனிமைப்படுத்தப்பட்டு, நிறமாலை பகுப்பாய்வுகளால், முதன்மையாக NMR மற்றும் MS ஆல் அடையாளம் காணப்பட்டது.

SDE மாதிரிகள் (0.1 மி.கி) 70% எத்தனாலில் (10 மி.லி) கரைக்கப்பட்டன. XSelect HSS T3 C18 நெடுவரிசையுடன் (4.6 × 250 மிமீ, 5) குரோமடோகிராஃபிக் பிரிப்பு செய்யப்பட்டது.μm, வாட்டர்ஸ் கோ., மில்ஃபோர்ட், MA, USA). மொபைல் கட்டம் 1.0 மிலி/நிமிடம் ஓட்ட விகிதத்தில் நீரில் (B) அசிட்டோனிட்ரைல் (A) மற்றும் 0.1% அசிட்டிக் அமிலத்தைக் கொண்டிருந்தது. ஒரு பலபடி சாய்வு நிரல் பின்வருமாறு பயன்படுத்தப்பட்டது: 5% A (0 நிமிடம்), 5–20% A (0–10 நிமிடம்), 20% A (10–23 நிமிடம்), மற்றும் 20–65% A (23–40 நிமிடம்). கண்டறிதல் அலைநீளம் 210–400 nm இல் ஸ்கேன் செய்யப்பட்டு 254 nm இல் பதிவு செய்யப்பட்டது. ஊசி அளவு 10.0 ஆகும்.μL. மூன்று குரோமோன்களை நிர்ணயிப்பதற்கான நிலையான தீர்வுகள் 7.781 மிகி/மிலி இறுதி செறிவில் தயாரிக்கப்பட்டன (முதன்மை-O-குளுக்கோசில்சிமிஃபுகின்), 31.125 மிகி/மிலி (4′-O-β-டி-குளுக்கோசில்-5-O-மெத்தில்விசம்மினோல்), மற்றும் 31.125 மிகி/மிலி (நொடி-O-குளுக்கோசில்ஹாமாடோல்) மெத்தனாலில் 4°C இல் வைக்கப்படுகிறது.

2.3. அழற்சி எதிர்ப்பு செயல்பாட்டின் மதிப்பீடுஇன் விட்ரோ

2.3.1. செல் வளர்ப்பு மற்றும் மாதிரி சிகிச்சை

அமெரிக்க வகை கலாச்சார சேகரிப்பிலிருந்து (ATCC, Manassas, VA, USA) RAW 264.7 செல்கள் பெறப்பட்டு 1% நுண்ணுயிர் எதிர்ப்பிகள் மற்றும் 5.5% FBS கொண்ட DMEM ஊடகத்தில் வளர்க்கப்பட்டன. செல்கள் 37°C இல் 5% CO2 ஈரப்பதமான வளிமண்டலத்தில் அடைகாக்கப்பட்டன. செல்களைத் தூண்டுவதற்கு, ஊடகம் புதிய DMEM ஊடகத்தாலும், லிப்போபோலிசாக்கரைடு (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, USA) 1 இல் மாற்றப்பட்டது.μSDE (200 அல்லது 400) முன்னிலையில் அல்லது இல்லாத நிலையில் g/mL சேர்க்கப்பட்டது.μg/mL) கூடுதலாக 24 மணிநேரத்திற்கு.

2.3.2. நைட்ரிக் ஆக்சைடு (NO), புரோஸ்டாக்லாண்டின் E2 (PGE2), கட்டி நெக்ரோசிஸ் காரணி ஆகியவற்றை தீர்மானித்தல்-α(டிஎன்எஃப்-α), மற்றும் இன்டர்லூகின்-6 (IL-6) உற்பத்தி

செல்கள் SDE உடன் சிகிச்சையளிக்கப்பட்டு 24 மணிநேரம் LPS உடன் தூண்டப்பட்டன. முந்தைய ஆய்வின்படி க்ரைஸ் ரீஜென்ட்டைப் பயன்படுத்தி நைட்ரைட்டை அளவிடுவதன் மூலம் எந்த உற்பத்தியும் பகுப்பாய்வு செய்யப்படவில்லை [12]. அழற்சி சைட்டோகைன்கள் PGE2, TNF- சுரப்பு.α, மற்றும் உற்பத்தியாளர் அறிவுறுத்தல்களின்படி ELISA கிட் (R&D அமைப்புகள்) ஐப் பயன்படுத்தி IL-6 தீர்மானிக்கப்பட்டது. NO மற்றும் சைட்டோகைன் உற்பத்தியில் SDE இன் விளைவுகள் வாலாக் என்விஷனைப் பயன்படுத்தி 540 nm அல்லது 450 nm இல் தீர்மானிக்கப்பட்டது.™ க்குமைக்ரோபிளேட் ரீடர் (பெர்கின்எல்மர்).

2.4. கீல்வாத எதிர்ப்பு செயல்பாட்டின் மதிப்பீடுவிவோவில்

2.4.1. விலங்குகள்

7 வார வயதுடைய ஆண் ஸ்ப்ராக்-டாவ்லி எலிகள், சாம்டகோ இன்க். (ஓசான், கொரியா) நிறுவனத்திடமிருந்து வாங்கப்பட்டு, 12-மணிநேர ஒளி/இருண்ட சுழற்சியுடன் கட்டுப்படுத்தப்பட்ட நிலைமைகளின் கீழ் வைக்கப்பட்டன.°C மற்றும்ஈரப்பதம் %. எலிகளுக்கு ஆய்வக உணவு மற்றும் தண்ணீர் வழங்கப்பட்டது.விருப்பப்படி. அனைத்து பரிசோதனை நடைமுறைகளும் தேசிய சுகாதார நிறுவனங்களின் (NIH) வழிகாட்டுதல்களுக்கு இணங்க நடத்தப்பட்டன மற்றும் டேஜியோன் பல்கலைக்கழகத்தின் (டேஜியோன், கொரிய குடியரசு) விலங்கு பராமரிப்பு மற்றும் பயன்பாட்டுக் குழுவால் அங்கீகரிக்கப்பட்டன.

2.4.2. எலிகளில் MIA உடன் OA இன் தூண்டல்

ஆய்வு தொடங்குவதற்கு முன்பு விலங்குகள் சீரற்ற முறையில் வகைப்படுத்தப்பட்டு சிகிச்சை குழுக்களுக்கு ஒதுக்கப்பட்டன (ஒரு குழுவிற்கு). MIA கரைசல் (3 மி.கி/50μL 0.9% உப்புநீரின்) மருந்து, கெட்டமைன் மற்றும் சைலாசின் கலவையால் தூண்டப்பட்ட மயக்க மருந்தின் கீழ் வலது முழங்காலின் உள்-மூட்டு இடத்திற்கு நேரடியாக செலுத்தப்பட்டது. எலிகள் தோராயமாக நான்கு குழுக்களாகப் பிரிக்கப்பட்டன: (1) MIA ஊசி இல்லாத உப்புநீரின் குழு, (2) MIA ஊசியுடன் MIA குழு, (3) SDE-சிகிச்சையளிக்கப்பட்ட குழு (200 மி.கி/கி.கி) MIA ஊசியுடன், மற்றும் (4) இண்டோமெதசின்- (IM-) சிகிச்சையளிக்கப்பட்ட குழு (2 மி.கி/கி.கி) MIA ஊசியுடன். எலிகளுக்கு MIA ஊசிக்கு 1 வாரத்திற்கு முன்பு 4 வாரங்களுக்கு SDE மற்றும் IM உடன் வாய்வழியாக வழங்கப்பட்டது. இந்த ஆய்வில் பயன்படுத்தப்பட்ட SDE மற்றும் IM இன் அளவு முந்தைய ஆய்வுகளில் பயன்படுத்தப்பட்டவற்றை அடிப்படையாகக் கொண்டது [10,13,14].

2.4.3. ஹிண்ட்பா எடை தாங்கும் பரவலின் அளவீடுகள்

OA தூண்டலுக்குப் பிறகு, பின்னங்கால்கள் எடை தாங்கும் திறனில் அசல் சமநிலை சீர்குலைந்தது. எடை தாங்கும் சகிப்புத்தன்மையில் ஏற்படும் மாற்றங்களை மதிப்பிடுவதற்கு ஒரு இயலாமை சோதனையாளர் (லின்டன் இன்ஸ்ட்ரூமென்டேஷன், நோர்போக், UK) பயன்படுத்தப்பட்டது. எலிகள் கவனமாக அளவிடும் அறையில் வைக்கப்பட்டன. பின்னங்காலால் செலுத்தப்படும் எடை தாங்கும் சக்தி 3 வினாடிகளுக்கு சராசரியாக இருந்தது. எடை விநியோக விகிதம் பின்வரும் சமன்பாட்டின் மூலம் கணக்கிடப்பட்டது: [வலது பின்னங்காலில் எடை/(வலது பின்னங்காலில் எடை + இடது பின்னங்காலில் எடை)] × 100 [15].

2.4.4. சீரம் சைட்டோகைன் அளவுகளின் அளவீடுகள்

இரத்த மாதிரிகள் 1,500 கிராம் அளவில் 4°C வெப்பநிலையில் 10 நிமிடங்களுக்கு மையவிலக்கு செய்யப்பட்டன; பின்னர் சீரம் சேகரிக்கப்பட்டு பயன்பாடு வரை −70°C இல் சேமிக்கப்பட்டது. IL-1 இன் அளவுகள்β, IL-6, TNF-α, மற்றும் சீரத்தில் உள்ள PGE2 ஆகியவை உற்பத்தியாளர் அறிவுறுத்தல்களின்படி R&D சிஸ்டம்ஸ் (மினியாபோலிஸ், MN, USA) இலிருந்து ELISA கருவிகளைப் பயன்படுத்தி அளவிடப்பட்டன.

2.4.5. நிகழ்நேர அளவு RT-PCR பகுப்பாய்வு

TRI reagent® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) ஐப் பயன்படுத்தி முழங்கால் மூட்டு திசுக்களிலிருந்து மொத்த RNA பிரித்தெடுக்கப்பட்டது, SYBR பச்சை நிறத்துடன் கூடிய TM One Step RT PCR கிட் (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA) ஐப் பயன்படுத்தி cDNA மற்றும் PCR-ஆம்ப்ளிஃபைடு என தலைகீழாக டிரான்ஸ்கிரிப்ட் செய்யப்பட்டது. அப்ளைடு பயோசிஸ்டம்ஸ் 7500 ரியல்-டைம் PCR அமைப்பைப் பயன்படுத்தி நிகழ்நேர அளவு PCR செய்யப்பட்டது (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA). ப்ரைமர் வரிசைமுறைகள் மற்றும் ஆய்வு வரிசை அட்டவணையில் காட்டப்பட்டுள்ளன.1. உற்பத்தியாளர் அறிவுறுத்தல்களின்படி (அப்ளைடு பயோசிஸ்டம்ஸ், ஃபாஸ்டர், CA, USA) டிஎன்ஏ பாலிமரேஸைக் கொண்ட TaqMan® யுனிவர்சல் PCR மாஸ்டர் கலவையுடன் மாதிரி cDNA களின் எண்ணிக்கை மற்றும் சம அளவு GAPDH cDNA பெருக்கப்பட்டது. PCR நிலைமைகள் 50°C இல் 2 நிமிடம், 94°C இல் 10 நிமிடம், 95°C இல் 15 வினாடிகள் மற்றும் 40 சுழற்சிகளுக்கு 60°C இல் 1 நிமிடம். உற்பத்தியாளர் அறிவுறுத்தல்களின்படி, ஒப்பீட்டு Ct (பெருக்க பிளாட் மற்றும் த்ரெஷோல்டுக்கு இடையே குறுக்குவெட்டில் த்ரெஷோல்ட் சுழற்சி எண்) முறையைப் பயன்படுத்தி இலக்கு மரபணுவின் செறிவு தீர்மானிக்கப்பட்டது.

FOB விலை:US $0.5 - 9,999 / துண்டு

குறைந்தபட்ச ஆர்டர் அளவு:100 துண்டுகள்/துண்டுகள்

விநியோக திறன்:மாதத்திற்கு 10000 துண்டுகள்/துண்டுகள்